Bcl-2 Western blot實(shí)驗(yàn)檢測(cè)

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B淋巴細(xì)胞瘤-2基因簡(jiǎn)稱(chēng)bcl-2（B-cell lymphoma-2）,是細(xì)胞凋亡研究中zui受重視的癌基因之一。

Bcl-2基因（即B細(xì)胞淋巴瘤/白血病-2基因）是一種癌基因，它具有抑制凋亡的作用，并且近年來(lái)的一些研究已開(kāi)始揭示這一作用的機(jī)制。目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)的Bcl-2蛋白家族按功能可分為兩類(lèi)，一類(lèi)是像Bcl-2一樣具有抑制凋亡作用，如哺乳動(dòng)物的Bcl-XL、Bcl-W、Mcl-1、A1、線(xiàn)蟲(chóng)Ced-9、牛痘病毒E1B119kD等，而另一類(lèi)具有促進(jìn)凋亡作用，如Bax、Bcl-Xs、Bax、Bak、Bik/Nbk、Bid和Harakiri。

zui初在血液淋巴細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)Bcl-2能抑制細(xì)胞死亡，隨后陸續(xù)在其它一些細(xì)胞中也發(fā)現(xiàn)Bcl-2的這種作用。但近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)，除這些之外尚存在Bcl-2不敏感的凋亡途徑。

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免疫印跡（immunoblotting）又稱(chēng)蛋白質(zhì)印跡（Western blotting），是根據(jù)抗原抗體的特異性結(jié)合檢測(cè)復(fù)雜樣品中的某種蛋白的方法。該法是在凝膠電泳和固相免疫測(cè)定技術(shù)基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的一種新的免疫生化技術(shù)。由于免疫印跡具有 SDS-PAGE 的高分辨力和固相免疫測(cè)定的高特異性和敏感性，現(xiàn)已成為蛋白分析的一種常規(guī)技術(shù)。免疫印跡常用于鑒定某種蛋白，并能對(duì)蛋白進(jìn)行定性和半定量分析。結(jié)合化學(xué)發(fā)光檢測(cè)，可以同時(shí)比較多個(gè)樣品同種蛋白的表達(dá)量差異。

成功完成Western Blot檢測(cè)，必須滿(mǎn)足4個(gè)條件：

凝膠洗脫：轉(zhuǎn)移期間蛋白質(zhì)必須從凝膠中洗脫出來(lái)，如果蛋白質(zhì)還截留在凝膠中，將無(wú)法在膜上進(jìn)行分析。
吸附到膜上：在轉(zhuǎn)移過(guò)程中蛋白質(zhì)必須吸附到膜上，如果蛋白不吸附，將無(wú)法在膜上進(jìn)行分析。
處理期間仍截留在膜上：在轉(zhuǎn)移后的處理過(guò)程中蛋白質(zhì)必須保持吸附在印跡膜上。
處理過(guò)程中可接近：被吸附的蛋白質(zhì)必須能夠與檢測(cè)試劑接觸，如果蛋白質(zhì)被掩蓋則無(wú)法檢測(cè)。
成功進(jìn)行WB檢測(cè)，則設(shè)置合適正確的對(duì)照是*的，只要正確設(shè)置了這些對(duì)照，即可快速和準(zhǔn)確的找到WB的問(wèn)題所在，并保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和特異性！

一般需要設(shè)置的對(duì)照如下：
陽(yáng)性對(duì)照：明確表達(dá)檢測(cè)蛋白的組織或細(xì)胞，用于檢測(cè)抗體的工作效率。
陰性對(duì)照：明確不表達(dá)檢測(cè)蛋白組織或細(xì)胞，用于檢測(cè)抗體的特異性
二抗對(duì)照：不加一抗，用于檢測(cè)二抗的特異性
內(nèi)參對(duì)照：檢測(cè)標(biāo)本的質(zhì)量和二抗系統(tǒng)
空白對(duì)照：不加一抗和二抗；用于檢測(cè)膜的性質(zhì)和封閉的效果  

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